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hela細胞復蘇實驗步驟

更新時間:2022-09-08瀏覽:1193次

  hela細胞(HeLa cell line)是生物學與醫(yī)學研究中使用的源自一位名叫Henrietta Lacks美國婦女的子宮頸癌細胞的細胞系。這名美國婦女在1951年死于該癌癥。為了讓Lacks保持匿名,此細胞株原宣稱是依[Helen Lane]命名。海拉細胞系被視為[不死的」(即,不同于其他一般的人類細胞,此細胞株不會衰老致死,并可以無限分裂下去),至今都被不間斷的培養(yǎng)。此細胞系跟其他癌細胞相比,增殖異常迅速。海拉細胞系被George Gey分送給眾研究單位(并未通知Lacks本人也未得到她的許可),并用作癌癥細胞模型(model cancer cells)研究。
 
  hela細胞復蘇實驗步驟:
 
  1.從零下80℃冰箱或者液氮罐中取出冷凍管,迅速投入37℃水浴中,使其融化(1分鐘左右)。
 
  2.培養(yǎng)基緩慢稀釋至原體積的10倍以上。
 
  3.低速離心10分鐘,吸去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基培養(yǎng)剛復蘇的細胞。
 
  4.六個小時細胞*貼壁后吸去含有凍存液的培養(yǎng)基并換成*培養(yǎng)基。
 
  hela細胞傳代實驗步驟:
 
  1.取密度80%左右的Hela細胞,吸去舊的培養(yǎng)基,用PBS或者Trypsin消化液潤洗細胞以減少殘留的血清對Trypsin的抑制作用。
 
  2.吸去PBS或者Trypsin,加入Trypsin消化液,于37℃消化2~4分鐘,于倒置顯微鏡下觀察,當細胞之間出現(xiàn)間時或者變圓時,吸掉Trypsin消化液。(也可以直接加入適量含血清的新鮮培養(yǎng)基終止Trypsin的消化作用并進行吹打分離細胞,消化細胞時應靜置以避免漂浮的細胞滾動成團)
 
  3.加入適量新鮮培養(yǎng)基,用移液器上下吹打數(shù)次打散細胞團塊以盡可能形成單細胞懸液,吹打均勻后,按照稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中,補充*培養(yǎng)基并以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。

 

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